血细胞是指外周血中的红细胞、白细胞和血小板的总称。而白细胞又包含五种,分别是中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。血细胞的计数通常选用牛鲍计数板法来镜下检查。
改良牛鲍计数板结构中高度为0.1mm,容积0.1μl;不同的细胞计数区域不同,白细胞计数区为四角大方格-单线,16中;红细胞和血小板计数区为中央大方格四角和中央-双线,25中,每中单线16小;其总的技术原则是压线细胞,数上不数下,数左不数右。
不同细胞计数之前需要进行稀释处理,常用的稀释液也是考试中常考考点,整理如下:
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稀释液 |
成分及作用 |
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RBC |
Hayem液氯化钠(NaCl)---调节渗透浓度 硫酸钠(Na2SO4)---防止红细胞聚集 氯化高汞(HgCl2)---防腐剂,有毒 |
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网织红细胞 |
WHO推荐新亚甲蓝 煌焦油蓝乙醇溶液---玻片法 煌焦油蓝生理盐水溶液---试管法 |
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白细胞 |
稀乙酸溶液破坏成熟红细胞 |
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嗜酸性粒细胞 |
保护剂:乙醇、丙酮、乙二醇 着色剂:溴甲酚紫、伊红、固绿等 破坏其他细胞和增强E着色物质:碳酸钾、草酸铵 抗凝剂:枸橼酸钠、EDTA 防止乙醇和液体挥发剂:甘油 |
血细胞的形态观察通常选用涂片法来镜下观察,因此血涂片的制备以及染色方法的选择,也是考点所在。记忆口诀为:二法,四因素,五标准。
1.二法
①手工推片→25°~30°夹角
②厚血膜涂片→疟原虫、微丝蚴
2.四因素
①血滴大小
②推片与载玻片间夹角
③推片速度
④血细胞比容
3.五标准
一张良好血片
①厚薄适宜
②头体尾明显
③细胞分布均匀
④血膜边缘整齐
⑤并留有一定空隙
血涂片制备完成后还需要进一步进行血液细胞染色,目前有两种染色方法,但最常用最简便的为-瑞氏染色法。
1.瑞氏染料(ME)
酸性伊红与碱性亚甲蓝溶解于甲醇。
2.染色原理
物理吸附与化学亲和作用
嗜酸性物质→伊红+Hb、嗜酸性颗粒
嗜碱性物质→亚甲蓝+细胞核蛋白、L及B胞质
3.pH值的影响
磷酸盐缓冲液(pH6.4~6.8)
①pH
②pH>pI→Pr带负电荷多→易与M+结合→染色偏蓝
4.方法学评价
瑞氏染色法:最经典最常用。细胞质、中性颗粒染色效果好。
吉姆萨染色法:细胞核、寄生虫(如疟原虫等)着色较好。
贮存时间愈久,染色效果愈好。
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