为了帮助参加临床执业医师考试的考生顺利复习,中公医考整理了2017临床执业医师医学免疫学学科(免疫PCR的参考流程)相关知识,同样适用于临床助理医师考试,供大家参考,希望可以帮助广大考生顺利通过考试!
1.用0.85%NaCl将细菌溶液稀释至一定浓度。
2.加50μl于微孔板内,4℃过夜。同时设阴性对照(加50μl0.85%NaCl于另一孔内)。
3.用400μl的0.05%温20pBS(以下简称TPBS),洗涤五次。
4.加入2.25%的100μl正常山羊血清(NGS)PBS封闭2小时。
5.用含0.15%NGS的TPBS洗3次中公医考|网编辑整理。
6.加入100μl用0.75%NGS适当稀释的单克隆抗体(内含100μg的,鲜鱼精DNA),室温孵育30min.
7.用TPBS洗涤五次。
8.加入50μl适量稀释的生物素化抗鼠IgG抗体,室温孵育30min.
9.用TPBS洗涤五次。
10.加入60μl适量稀释的生物素化DNA和亲和素,室温孵育30min.
11.用TPBS洗涤五次,再用HPLC级水洗三次。
12.PCR扩增:加入50μlPCR反应液(内含T3和T7引物),95℃60sec,50℃110sec,72℃110sec,循环30次.取PCR产物10μl于1.7%琼脂糖凝胶上电泳,和核酸分子量标准相比较,在相应的位置邮现电泳带为阳性,必需时将电泳结果照相,进行定量分析。
上文就是“免疫PCR的参考流程”的全部内容,希望以上内容能给大家提供便利!中公医考网小编预祝广大考生考试顺利!
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